Dentro
do atual contexto da pandemia pelo novo coronavírus (Covid-19), a importância
de um correto diagnóstico para confirmação e exclusão de novos casos vem sendo
ressaltada. Com este texto, queremos trazer a base biológica do diagnóstico da
Covid-19 pela técnica do RT-PCR que vem sendo utilizado por laboratórios de
análises clínicas ao redor do mundo.
A sigla RT-PCR significa, em
português, reação da transcriptase reversa seguida pela reação em cadeia da
polimerase. Com esta nomenclatura, entendemos que são necessárias duas reações
para o resultado final. Mas, como começamos? O processo inicia a partir da
coleta de amostra nasal ou da orofaringe da pessoa com suspeita da doença. A
partir dessa amostra, todo RNA presente será extraído, inclusive do vírus se
esse estiver presente. Com o RNA extraído, acontece a primeira reação que é a
da transcriptase reversa. Ou seja, transformamos o RNA, que é uma fita simples
de ácido nucléico, em uma fita dupla que será chamado de DNA complementar ou
cDNA.
A partir da obtenção do cDNA,
realiza-se a reação em cadeia da polimerase. Essa técnica utiliza primers, que
são sequências curtas de nucleotídeos específicas para detectar a presença do
material genético do vírus e uma enzima, chamada polimerase, que vai catalisar
essa reação. A reação irá acontecer por diversos ciclos que permite, a cada
ciclo, aumentar o número de cópias presentes se o cDNA presente for equivalente
ao primer utilizado. Assim, apenas quando realmente temos a presença do vírus
na amostra teremos a amplificação e detecção específica. Portanto, a técnica do
RT-PCR para diagnóstico do vírus SARS-Cov-2, o vírus que causa a Covid-19, é
sensível, seguro e confiável.
Vale ressaltar que o RT-PCR é uma técnica
da biologia molecular que foi desenvolvida a partir do ano de 1983. Apesar de
relativamente recente, é um técnica extremamente difundida por laboratórios
devido às várias aplicações que podemos realizar a partir dela. Além do
diagnóstico de infecções como explicamos aqui, o RT-PCR também pode ser
utilizado para investigações criminais e para avaliação da expressão gênica.
Nesse último caso, o RT-PCR é bastante utilizado para pesquisas que buscam
entender o efeito de tratamentos na expressão gênica das células, por exemplo,
que executamos na Núcleo Vitro.
Portanto, esse artigo trouxe a base
técnica relacionada a técnica do RT-PCR que tem diversas aplicações e que vem
sendo muito importante para o diagnóstico da Covid-19. Assim, ressalta-se o
valor da pesquisa para, juntos, superarmos a atual situação.